霸王基因组RAPD优化条件的建立

摘要/Abstract

摘要： 实验以霸王20 d龄无菌籽苗为材料,使用CTAB法提取其基因组DNA，进行RAPD条件优化分析。通过单因子实验分别研究了Mg2+浓度、dNTPS浓度、Taq酶的浓度、引物浓度和模板DNA浓度对RAPD反应的影响，即在25 μL总反应体系中，Mg2+的适宜浓度为1.5~2.5 mmol\5L-1、dNTPs的适宜浓度为0.2~0.3 mmol\5L-1、随机引物的浓度以1.2 μmol\5L-1为宜、Taq酶的用量以2.0 U为佳、模板DNA的最适用量为50 ng。本研究的PCR扩增程序为94℃预变性8 min, 94℃变性1 min, 37℃退火1 min, 72℃延伸2 min,设40个循环，最后72℃保温6 min。

关键词: 霸王, RAPD, PCR, 条件优化

Abstract: Sarcozygium xanthoxylon Maxim genomic DNA, extracted from its sterile 20 days old seedlings by CTAB method, was used as RAPD amplification template. The effects of main elements, including concentration of Mg2+, dNTPs, DNA, primer and Taq polymerase dosage on RAPD amplification were studied through single factor experiment. A following efficient protocol for optimal reaction system of RAPD analysis in Sarcozygium xanthoxylon Maxim was established , i.e , the 25 μL reaction mixture contained 1.5~2.5 mmol·L-1 Mg2+, 0.2~0.3 mmol·L-1 of each dNTPs, 1.2 μmol·L-1 arbitrary primer, 2.0 U Taq polymerase, 50 ng template DNA . The amplification was performed as follows: 94℃ pre-denaturation for 8 min, 40 cycles of 94℃ for 1 min, 37℃ for 1 min, 72℃ for 2 min, and 72℃ extension for 6 min.

Key words: Sarcozygium xanthoxylon Maxim, RAPD(Random amplified polymorphic DNA), PCR(Polymerase chain reaction), optimization

中图分类号:

Q943.2

郝瑞文;景建洲;李振勇;贾敬芬*. 霸王基因组RAPD优化条件的建立[J]. 中国沙漠, 2006, 26(2): 286-290.

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